免疫荧光（IF）是一种简单、可靠、可重复的免疫病理学方法。它检测循环中存在的免疫沉积物，这些沉积物与许多疾病的病理生理学有关，特别是那些影响皮肤和肾脏系统的疾病。在新鲜冷冻组织上直接免疫荧光一直是金标准。然而，在新鲜冷冻组织上的免疫荧光确实在临床环境中存在一些缺点，如厚的冷冻切片或抗原可能出现弥漫性分布，这使得分析具有挑战性。此外，不充分的冷冻组织可能导致诊断精度降低。最后，在冻结部分完成后，不能对其进行重新评估。在这种情况下，可以使用对经福尔马林固定和石蜡包埋的组织使用替代程序的打捞方法。有几种抗原回收技术用于克服福尔马林固定、石蜡包埋组织中抗原掩蔽的问题，采用蛋白酶K、胰蛋白酶和热诱导抗原回收。研究表明，对大多数致病性抗体，在福尔马林固定、石蜡包埋的组织上使用免疫荧光技术获得的结果与在冷冻切片上获得的结果相当。然而，大多数研究都是肾脏活检，只有少数研究是皮肤活检。本研究比较了新鲜冷冻免疫荧光与石蜡免疫荧光在皮肤活检中蛋白酶K消化后的诊断价值。

材料和方法：将其标准化，并与新鲜冷冻组织（IF - frozen）上的免疫荧光进行比较，通过蛋白酶K消化福尔马林固定石蜡包埋皮肤活检（IF - FFPE）进行石蜡免疫荧光。该研究包括50例原生皮肤活检病例，并评估每个病例的异硫氰酸荧光素标记的IgA、IgG、IgM和C3强度水平。

1例寻常型天疱疮的免疫荧光图(a)冷冻切片显示4+ IgG的细胞间隙图（FITC标记抗体使用IgG， 20倍）与(b)石蜡切片显示4+ IgG的细胞间隙图（FITC标记抗体使用IgG， 40倍）；皮肤红斑狼疮1例免疫荧光分析。(c)冷冻切片中显示颗粒状3+ C3的基膜区（FITC标记的抗体使用C3, 4×）与(d)石蜡切片中显示颗粒状3+ C3的基膜区（FITC标记的抗体使用C3, 4×）

不同石蜡免疫荧光法与新鲜冷冻免疫荧光法比较的平均强度和强度差

新鲜冷冻组织的免疫荧光对比石蜡包埋皮肤活检

IF -FFPE法检测50例皮肤病例IgA、IgG、IgM、C3的敏感性和特异性

结果：本研究共纳入50例皮肤活检患者，比较其IgA、IgG、IgM、C3抗体强度。各疾病组抗体的平均染色强度相等或差异较小(1+)/差异显著（2+）。石蜡免疫荧光法、蛋白酶K酶切法与鲜冻免疫荧光法的相关性最好，即与鲜冻免疫荧光法相差1±。IF - FFPE与IF - Frozen抗体2+强度的差异主要体现在副肿瘤天疱疮的C3抗体上。IF - FFPE对IgA、IgG、IgM和C3的敏感性分别为100%、97.6%、100%和81.6%，而对IgA、IgG、IgM和C3的特异性为100%。局限性：样本量小，并且在IFFFPE中使用一种抗原检索方法。

结论：福尔马林固定石蜡包埋组织免疫荧光技术可作为冷冻切片免疫荧光不充分或不可用的抢救技术。

原始出处：

Nipan, Das;  Biswajit, Dey;  Rennie Orson, Lakadong;Diagnostic Utility of Immunofluorescence on Formalin-Fixed Paraffin-Embedded Skin Biopsy.Indian Dermatol Online J 2024 Jul-Aug;15(4):620-623