内容摘要
一、病理检查流程
二、固定及取材影响因素
固定目的
1.保持离体组织细胞的形态；
2.细胞内特殊物质定位；
3.保持细胞内抗原、DNA及RNA；
4.硬化组织有利于切片；
5.便于对细胞内不同成分区别。
影响因素
固定：
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标本离体是否在一个时间点及时固定；
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固定剂的重要特征——可使蜡块的HE染色保持高质量和一致性，无论在初始还是在保存10年后；
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固定的方法；
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固定的时间与标本的大小。
取材：
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组织取材厚度及大小；
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小标本取材用相应材料包裹；
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脱水盒中组织放置方向；
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去除组织内杂物；
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骨组织及钙化组织脱钙；
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脱钙标本脱钙时间或流水冲洗时间；
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标本是否干涸。
三、组织处理影响因素
全自动脱水机注意事项
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选择程序；
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开机前检查试剂液面；
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开机前擦拭探头；
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脱水篮放置平稳；
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不可擅自更改脱水程序；
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发生问题时判断原因，不能随意处理；
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运行机器时不能误操作；
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使用试剂及时更换；
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更换试剂时位置更换准确；
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更换试剂后设置全部试剂状态；
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在开机前对机器做简单维护；
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开机后再检查机器运行状态。
四、包埋流程影响因素
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包埋前应清理台面上残留组织碎屑；
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使用的包埋模具应清洁；
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准确判断包埋面；
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按要求进行包埋；
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发现问题及时和取材医师沟通反馈。
五、石蜡切片流程影响因素
毛笔：洁净、无蜡屑、无异物；
弯镊：洁净、无蜡屑、无异物，必要时使用无水乙醇擦拭；
一次性刀片：锋利、无缺口；
载玻片：洁净、无油腻、无水渍及污物；
载玻片打号机：用于打印相应蜡块的病理编号于载玻片上；
轮转式切片机：人工、半自动或全自动；
冷冻台：用于切片前的蜡块冷却，使蜡块维持一定的切片硬度；
漂片仪/水浴锅：用于蜡片的漂片展平；
烤片机/烤箱：用于切片的烘烤和沥水。
六、分子病理检测切片影响因素
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及时登记（蜡块、申请单）、及时归档（蜡块、HE等）；
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及时清洁切片台面；
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准备干净的载玻片；
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切片工具的清洁；
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脱蜡试剂要定期更换；
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每天一次清洗水浴锅；
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切每个标本更换刀片，用75%酒精进行刀架消毒，防止污染；
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写片时，要写全关联医嘱的病理号，包括年份和蜡块小号，肿瘤区域富集细胞等，方便后续切片评估和核对蜡块；
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有问题及时与诊断医生沟通（指标,小号与免疫组化不一致）。
七、HE染色影响因素
烤片：烤片时间需充分，防止在染色过程中发生脱片；
脱蜡：脱蜡要彻底，防止染色时切片不易着色；
胞核染色：①苏木素染核 ②盐酸酒精分化 ③蓝化.；
胞浆染色：伊红染胞浆；
脱水：梯度酒精脱水；
透明：透明要彻底。
八、分子病理检测三大主流技术
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FISH
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测序技术：Sanger测序、NGS
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PCR：qPCR/RT-qPCR、ARMS、ddPCR
FISH操作影响因素
组织固定不充分，FISH预处理时组织脱落，镜下可见细胞呈“棉絮状”或“软团块状”。组织固定过度，可能导致样本蛋白等大分子物过度交联，镜下“细胞核可见空洞、DAPI过分均质”
二者都可能出现信号减弱或无信号。
切片太薄（实际厚度＜3μm），容易消化过，具信号出现很大比例的丢失，影响结果判读；
切片太厚（实际厚度>5μm），难于消化，容易出现高背景，信号层面增多影响观察判读。
脱蜡不足：后续实验步骤都无法补教，导败背景高甚至探针杂交失败。脱蜡使用的二甲苯需经常更换，并可根据实际情况延长脱蜡时间。
石蜡样本基因提取要点总结
1、样本评估、优化流程：
选取瘤细胞丰富，无坏死、粘液、软骨区域。
珍惜穿刺小标本，HE切片同时或初诊后及时留取组织蜡片优先保证分子检测。
2、严格消毒、蜡片量适当：
单人单刀口，75%酒精彻底消毒刀架、镊子等。操作者带口罩、手套。
5μm厚蜡片大块组织2-4张，小组织5-8片。组织量不宜过多。
3、脱蜡彻底、酶解完全
二甲苯脱蜡3次，13000x3min/次
蛋白酶K裂解完全（56℃），胶原等组织少量残余不影响后续检测，推荐水浴，可过夜，酶解时间长可获得更长的片段。
4、根据样本调整洗脱液量
通过调整DNA洗脱液量间接调节DNA浓度（小标本）
PCR上样时，直接用脱液稀释模板>100ng/μl，倍比稀释。
注：低盐高pH洗脱
ARMS结果判定注意点
九、总结
常规技术流程繁琐、制作过程需要操作精细，每一步操作都可能影响到后续的质量；是做出准确病理诊断的关键。